Depois de utilizar peróxido de hidrogénio (especialmente peróxido de hidrogénio vaporizado VHP) para desinfecção e esterilização em armários de biossegurança, a monitorização rigorosa e científica e a verificação dos resultados são a única forma de confirmar a eficácia da esterilização, bem como os requisitos fundamentais para o controlo de qualidade e conformidade regulamentar. Este não é simplesmente um processo de “executar o dispositivo”, mas um processo-de circuito fechado que requer diversas evidências físicas, químicas e biológicas.
A seguir está uma análise sistemática das técnicas de monitoramento e validação.
Princípio fundamental: Sistema de verificação tripla
Uma validação completa deve incluir “monitoramento de parâmetros de processo”, “indicadores químicos” e “testes de desafio de indicadores biológicos”, todos complementares e indispensáveis.
Monitoramento de parâmetros de processo (monitoramento-em tempo real para garantir que as condições atendam aos padrões)
Essa é a primeira linha de defesa para verificação, que envolve o registro-em tempo real dos principais parâmetros físicos e químicos por meio de sensores do dispositivo, comprovando que o ciclo de esterilização opera dentro da faixa de parâmetros definida e efetiva.
Parâmetros de monitoramento:
Concentração de vapor de peróxido de hidrogênio (ppm): o parâmetro mais crítico. Deve ser alcançado e mantido na concentração alvo predeterminada (por exemplo, centenas de ppm) durante um período de tempo suficiente. Baixa concentração pode levar à falha na esterilização.
Umidade relativa (% UR): controlada em um nível baixo (geralmente<40%) to ensure that VHP is in an efficient "micro condensation" state rather than large droplet condensation. Excessive humidity can dilute disinfectants and may damage equipment.
Temperatura: Monitore a temperatura da câmara, que afeta a pressão do vapor saturado e o processo de condensação.
Pressão/fluxo de ar: Certifique-se de que a câmara esteja vedada e que a circulação de gás esteja normal.
Tempo de exposição: A duração mantida na concentração alvo.
Como executar:
Completado automaticamente pelos sensores e sistema de controle integrados ao gerador VHP.
Requisito principal: O equipamento deve ser capaz de gerar e armazenar gráficos completos de dados cíclicos (curva de tempo de concentração, curva de temperatura e umidade), que devem ser incluídos como parte do relatório de validação. Qualquer desvio de parâmetro da faixa predefinida deverá resultar em um alarme ou encerramento do loop.
Indicadores químicos (resultados visuais qualitativos/semiquantitativos,-em tempo real)
Usado para determinar de forma rápida e intuitiva se um item está exposto a um ambiente de esterilização com peróxido de hidrogênio e pode refletir indiretamente se a dosagem é suficiente.
Tipo e princípio:
Cartão indicador químico tipo etiqueta: Contém corantes sensíveis ao peróxido de hidrogênio. Quando uma quantidade suficiente de dose de peróxido de hidrogênio (concentração x tempo) é acumulada, ocorrem mudanças irreversíveis de uma cor para outra.
Local de colocação: Deve ser colocado no local de esterilização de mais difícil acesso, como:
O canto mais profundo da área de trabalho do gabinete seguro.
Dentro do canal de drenagem.
A junta entre o filtro e a estrutura de instalação (se possível).
Tubo de exaustão interno (se coberto por desinfecção).
Função e limitações:
Função: Fornece resultados imediatos para liberação rápida; Confirme se o vapor foi distribuído no local designado; Como um identificador para distinguir entre itens “processados” e “não processados”.
Limitações: Só pode comprovar exposição, não pode comprovar esterilidade. A mudança de cor indica apenas que o limite mínimo de dose foi atingido, mas não garante a morte de todos os microrganismos.
Teste de desafio de indicador biológico (quantitativo, prova de eficácia final)
Este é o padrão ouro de verificação e evidência decisiva. Ao utilizar esporos microbianos padronizados com alta resistência conhecida, fica diretamente comprovado que o processo de esterilização é suficiente para matar os microrganismos mais difíceis de matar.
Seleção de indicadores biológicos:
Cepa padrão: Esporos de Geobacillus stearothermophilus. Esta é a bactéria de teste padrão reconhecida internacionalmente com a maior resistência ao peróxido de hidrogênio.
Forma de suporte: geralmente uma tira de papel manchada com gotículas de suspensão de esporos, folha de aço inoxidável ou instalada em um suporte específico.
Contagem conhecida de esporos: Cada indicador biológico contém um número conhecido de esporos, normalmente 10 ^ 5 a 10 ^ 6 UFC (unidades formadoras de colônias).
Estratégia de posicionamento (a etapa mais crítica):
Localização: Deve ser colocado no “ponto mais frio” onde a esterilização é mais desafiadora ou onde o gás é mais difícil de penetrar. Para gabinetes de biossegurança, os locais recomendados incluem:
Sob a bancada, no canto próximo à grade frontal.
A junção entre a parede posterior e a bancada.
Na parte traseira ou em espaços de instrumentos internos, como porta-pipetas.
Se o escopo da verificação incluir o interior da válvula de escape ou tubulação.
Quantidade: Utilize pelo menos 3 indicadores biológicos e inclua um controle positivo não tratado.
Processo de teste e interpretação:
Exposição: Execute um ciclo completo de esterilização VHP com o gabinete BI.
Reciclagem e cultivo:
Após a conclusão do ciclo, remova o BI em condições estéreis.
Coloque-o em um tubo de recuperação dedicado contendo meio de cultura.
Cultivar em incubadora de 56-60 graus C por 24-48 horas (horário específico de acordo com as instruções).
Cultive simultaneamente controle positivo (não esterilizado) e controle negativo (meio de cultura estéril).
Interpretação do resultado:
Verificação bem-sucedida: Todos os meios de cultura BI esterilizados permanecem claros (sem descoloração/turbidez), indicando que não há sobrevivência de esporos. O controle positivo deve apresentar crescimento ativo (amarelecimento/turbidez do meio de cultura), e o controle negativo deve permanecer límpido.
Falha na verificação: Qualquer BI processado que apresente crescimento (amarelecimento/turbidez) indica falha no ciclo de esterilização. É necessário investigar minuciosamente os motivos (como erros de parâmetros, posicionamento, mau funcionamento do equipamento, problemas de vedação, etc.), ajustar o plano e realizar novamente uma verificação completa.
Ciclo e tipo de verificação
Primeira verificação:
Após a instalação do equipamento VHP ou a esterilização inicial de um novo tipo de cabine de segurança, esta deverá ser realizada.
Esta é a verificação mais abrangente, que requer a determinação do “ponto mais frio” e o estabelecimento de parâmetros de loop eficazes.
Revalidação regular:
Geralmente realizado a cada seis meses ou anualmente.
Usado para confirmar a consistência de equipamentos, programas e operadores.
Monitoramento diário:
Devem ser utilizados indicadores químicos para cada ciclo de esterilização e os mapas de parâmetros do processo devem ser revistos.
A frequência dos testes de indicadores biológicos pode ser reduzida conforme apropriado (como mensal ou trimestralmente), mas áreas com regulamentações rigorosas podem exigir o uso de cada lote/ciclo.
Registros e relatórios de documentos (evidência de conformidade)
Todas as atividades de monitorização e verificação devem ser documentadas formalmente e o relatório deve incluir pelo menos:
Informações do equipamento: modelo e número do gerador VHP.
Informações do dispositivo alvo: modelo do gabinete de biossegurança, número, localização.
Parâmetros de loop: definir concentração alvo, tempo, temperatura e umidade, etc.
Gráfico de dados do processo: curva de tempo de concentração da operação real, etc.
Indicadores químicos: tipo, número de lote, local de colocação, resultados de mudança de cor (com fotos em anexo).
Indicadores biológicos: cepa, número de lote, quantidade de esporos, local de colocação, resultados de cultura (anexados com fotos do tubo de cultura).
Conclusão: Determine claramente se o ciclo de esterilização é eficaz.
Executor e Data: Assinatura do operador e revisor.
resumo
A esterilização não esterilizada equivale a nenhuma esterilização.
Um sistema de validação confiável para desinfecção e esterilização com peróxido de hidrogênio de cabines de biossegurança é:
Garanta o controle do processo por meio de "mapeamento de parâmetros de processo", obtenha liberação visual rápida por meio de "indicadores químicos" e, por fim, obtenha certificação de eficácia final microbiológica por meio de "testes de desafio de indicadores biológicos".
Este sistema de validação tripla é a chave para elevar a desinfecção com peróxido de hidrogênio de uma "operação" para uma "ciência" rastreável, reproduzível e confiável, e também é a pedra angular para atender aos requisitos de GLP, GMP e acreditação de laboratórios de biossegurança no país e no exterior. Os gestores do laboratório devem implementar isto como um procedimento obrigatório e monitorizá-lo continuamente.
